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ELISA試劑盒的影響因素
更新時間:2016-06-07   點(diǎn)擊次數(shù):1457次

ELISA試劑盒,即酶聯(lián)免疫法。ELISA法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的特點(diǎn),并具有操作簡便、無放射性危害的優(yōu)點(diǎn),因而多年來廣泛應(yīng)用于各高校、醫(yī)院、血站和科研機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室中。 
影響ELISA實(shí)驗(yàn)的因素
我們技術(shù)人員通過幾年的實(shí)驗(yàn)觀察,認(rèn)為影響ELISA實(shí)驗(yàn)的因素有如下三方面:
一、試劑盒
1、抗原、抗體活性對效價(jià)的影響:主要是試劑中抗體(或抗原)的效價(jià)降低或失活,結(jié)果不易判斷。再有
ELISA試劑盒靈敏度高,對雜質(zhì)的反應(yīng)靈敏度也高,實(shí)驗(yàn)中空白對照OD值偏高或假陽性;
2、酶結(jié)合物濃度過高,也會導(dǎo)致OD值假性增高。

二、試驗(yàn)儀器
1、加樣器是否經(jīng)過校正,酶免測定血清用血量很少,如手工加樣器的性能不好,吸取樣品不,會使結(jié)果忽高忽低;
2、每次洗板前,應(yīng)檢查洗板機(jī)針孔有無堵塞。
三、操作
1、檢測前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用,試劑用完及時放回冰箱冷藏,以免造成試驗(yàn)結(jié)果假性降低;
2、加樣時注意勿觸及包被板底部,以免擦傷包被物使抗體(抗原)脫落而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性;
3、洗滌不充分,會使結(jié)果假性增高,過分洗滌呈假陰性;
4、比色時應(yīng)保持包被孔底部無異物、無水汽,特別是冬季板從37℃水浴箱取出時,底部留有水汽,應(yīng)將板底擦干后進(jìn)行比色,水汽或孔內(nèi)氣泡也會使OD值升高;
5、抗原與抗體反應(yīng)達(dá)到*平衡,依賴于溫度與時間。溫度高于45℃易引起失活及標(biāo)記物脫落,溫度低于4℃,影響反應(yīng)速度。
總之,由于
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的影響因素較多,在實(shí)際工作中必須操作規(guī)范、仔細(xì),避免和排除各種因素的影響,使之得到準(zhǔn)確可靠的檢驗(yàn)結(jié)果。

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